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革蘭氏染色液是什么

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發布日期:2018-08-15 作者: 點擊:

北京十一选五前三组预测 www.tzfpx.icu 革蘭氏染色

一、目的:在細胞發放之前,利用標準的革蘭氏染色法對即將發放的細胞懸液進行檢測,判斷細胞懸液中是否含有革蘭氏陽性菌或革蘭氏陰性菌.

二、原理:

通過結晶紫初染和碘液媒染后,在細胞壁內形成了不溶于水的結晶紫與碘的復合物,革蘭氏陽性菌由于其細胞壁較厚、肽聚糖網層次較多且交聯致密,故遇乙醇脫色處理時,因失水反而使網孔縮小,再加上它不含類脂,故乙醇處理不會出現縫隙,因此能把結晶紫與碘復合物牢牢留在壁內,使其仍呈紫色;而革蘭氏陰性菌因其細胞壁薄、外膜層類脂含量高、肽聚糖層薄且交聯度差,在遇脫色劑后,以類脂為主的外膜迅速溶解,薄而松散的肽聚糖網不能阻擋結晶紫與碘復合物的溶出,因此通過乙醇脫色后仍呈無色,再經沙黃等紅色染料復染,就使革蘭氏陰性菌呈紅色.

三、實驗用品準備:

滅菌玻片、10-100ul移液器、10-100ul滅菌移液吸頭、100ul-1000ul移液器、100ul-1000ul移液吸頭、接種環、酒精燈、打火機、革蘭氏染色液、吸水紙、顯微鏡、香柏油、擦鏡紙、計時器

四、操作:

1 涂片:取滅過菌的載玻片于實驗臺上,用移液槍吸取10ul待檢樣品滴在載玻片的中央,用燒紅冷卻后的接種環將液滴涂布成一均勻的薄層,涂布面不宜過大.

2 干燥:將標本面向上,手持載玻片一端的兩側,小心地在酒精燈上高處微微加熱,使水分蒸發,但切勿緊靠火焰或加熱時間過長,以防標本烤枯而變形.

3 固定:固定常常利用高溫,手持載玻片的一端,標本向上,在酒精燈火焰處盡快的來回通過2-3次,共約2-3秒種,并不時以載玻片背面加熱觸及皮膚,不覺過燙為宜(不超過60℃),放置待冷后,進行染色.

4 初染:在涂片薄膜上滴加草酸銨結晶紫1-2滴,使染色液覆蓋涂片,染色約1min.

5 水洗:斜置載玻片,在自來水龍頭下用小股水流沖洗,直至洗下的水呈無色為止.

6 媒染:用100-1000ul移液槍吸取約300ul碘液滴在涂片薄膜上,使染色液覆蓋涂片,染色約1min.

7 水洗:斜置載玻片,在自來水龍頭下用小股水流沖洗,直至洗下的水呈無色為止.

8 脫色:斜置載玻片,滴加95%乙醇脫色,至流出的乙醇不現紫色為止,大約需時20-30S,隨即水洗.

9 復染:在涂片薄膜上滴加沙黃染液1-2滴,使染色液覆蓋涂片,染色約1min.

10 水洗:斜置載玻片,在自來水龍頭下用小股水流沖洗,直至洗下的水呈無色為止.

11 干燥、觀察:用吸水紙吸掉水滴,待標本片干后置顯微鏡下,用低倍鏡觀察,發現目的物后滴一滴浸油在玻片上,用油鏡觀察細菌的形態及顏色,紫色的是革蘭氏陽性菌,紅色的是革蘭氏陰性菌


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